0

Uruchamianie żelu mocznikowego do analizy Northern Blot

  1. Wlać 6% żel poliakryloamidowy podobny do nalewania w przypadku elektroforezy SDS, z wyjątkiem zastąpienia SDS mocznikiem 8,3 M, bez żelu do układania w stos i użycia buforu TBE zamiast Tris i Glycine. Mocznik można wstępnie rozpuścić w odpowiedniej ilości buforu TBE (45 mM Tris, pH 8, 45 mM kwas borowy, 1 mM EDTA) poprzez ogrzewanie w kuchence mikrofalowej, w 1x buforze TBE w szklanej kolbie, a następnie lekko obracając . Następnie można dodać poliakryloamid, nadsiarczan amonu i TEMED.
  2. Barwnik do nakładania powinien zawierać cyjanol ksylenowy, błękit bromofenolowy, 0,1% SDS, 93% dejonizowany formamid, 80 ug / ml RNA drożdży i glicerol i powinien być przechowywany w temperaturze -20 stopni C.
  3. Ogrzewać próbki w 93 ° C przez 3 min. w ładowaniu barwnika.
  4. Uruchomić żel używając 1x buforu TBE jako buforu roboczego, aż do uzyskania odpowiedniej separacji między prążkami.
  5. Wizualizować, barwiąc żel mocznikowy bromkiem etydyny lub barwnikiem SYBR Safe, albo przenosząc go na nitrocelulozę podobnie jak w Western blot i wykonując analizę Northern blot standardowymi procedurami.

Pawel

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *